Mar 19, 2025

Public workspacePOP – Mudança do HPLC da Fase Reversa para Fase Normal

DOI
dx.doi.org/10.17504/protocols.io.rm7vz6m5rgx1/v1
  • 1UFRJ
Ricardo M. Borges
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DOI: dx.doi.org/10.17504/protocols.io.rm7vz6m5rgx1/v1
Protocol Citation: Ricardo M. Borges 2025. POP – Mudança do HPLC da Fase Reversa para Fase Normal. protocols.io https://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.rm7vz6m5rgx1/v1
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Protocol status: In development
We are still developing and optimizing this protocol
Created: March 19, 2025
Last Modified: March 19, 2025
Protocol Integer ID: 124674
Abstract
Goal Change the HPLC configuration from reverse phase to normal phase using two HPLC-grade solvents: Methanol and Isopropanol.

Objetivo
Alterar a configuração do HPLC da fase reversa para a fase normal utilizando dois solventes grau HPLC: Metanol e Isopropanol.
Materials
Materiais Necessários
  • Solventes:
  1. Metanol (grau HPLC)
  2. Isopropanol (grau HPLC)

  • Conector metálico
  • Fits A e B
  • Equipamentos HPLC e software de controle


Preparação Inicial
Preparação Inicial
Retirar a coluna:
  • Remova a coluna atual do sistema.
Substituição pelo conector metálico:
  • Instale o conector metálico no lugar da coluna.

Configuração com Metanol

  1. Inserir solvente nos fits:
  • Conecte os fits A e B a uma garrafa contendo Metanol.

2. Purga:
  • Realize o procedimento de purga por 5 minutos.
Ajuste da Bomba com Metanol
  1. Ajuste do fluxo:
  • Abra qualquer método disponível.
  • Ajuste a bomba (pump) para 50% utilizando a tabela à direita na tela do software (esse ajuste não altera o método aberto).

2. Ativação do sistema:
  • Clique em system on.
  • Aumente gradativamente o fluxo até 4 mL/min.
  • Aguarde cerca de 5 minutos para estabilização.
Repetição do Procedimento com Isopropanol
  1. Repetir passos 1 a 4-2 utilizando Isopropanol:
  • Execute novamente os passos 1 a 6, substituindo o Metanol por Isopropanol.
Configuração Final para Análise
  1. Preparar solventes para análise:
  • Coloque os solventes que serão utilizados na análise nas respectivas fases A e B.

2. Nova purga:
  • Realize novamente o procedimento de purga.

3. Retornar à coluna:
  • Remova o conector metálico e reinstale a coluna que será utilizada na análise.

4. Seleção do método:
  • Selecione o método desejado ou crie um novo método conforme os parâmetros da análise.